Pruebas de ensayo HPLC: qué son y por qué son importantes

Introducción a las pruebas de ensayo HPLC

Cuando una empresa farmacéutica, agroquímica o de bienes de consumo de alta rotación (FMCG) desarrolla o comercializa un producto, debe mencionar el contenido de los artículos o ingredientes (% p/p) de ese producto en su etiqueta. Esta prueba o ensayo de contenido en % p/p es importante antes de lanzar el producto al mercado.

Comprensión del ensayo HPLC

El término «ensayo» se refiere al contenido cuantitativo de un compuesto y a su valor relativo calculado frente a su estándar correspondiente. Una técnica que apoya este objetivo es la determinación del ensayo mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Una de las ventajas de la HPLC es que es una excelente técnica analítica cuantitativa. Se utiliza para cuantificar los componentes primarios o mayoritarios de una muestra, tanto en mezclas de varios componentes como en trazas presentes en ella.

Requisitos de desarrollo del método

Ahora bien, dado que la prueba de «ensayo por HPLC» es una prueba importante entre todas las demás para definir la calidad del producto, se requiere que el método de HPLC utilizado para determinar el ensayo sea igualmente bueno. El desarrollo de un buen método de HPLC cuantitativo requiere comprender los conceptos críticos de exactitud, precisión, linealidad y especificidad. Comprender… ciclo de vida completo del método analítico es esencial para el desarrollo e implementación exitosos de métodos.

Parámetros analíticos clave

La exactitud es la proximidad del valor medido al valor real. La precisión se refiere a la reproducibilidad de múltiples mediciones de una muestra homogénea. Esto puede incluir la reproducibilidad de los resultados utilizando diferentes instrumentos, analistas, laboratorios, etc. La linealidad de un método es una medida de la respuesta frente a la concentración que se aproxima a una línea recta.

La especificidad o selectividad del método de ensayo HPLC consiste en demostrar la ausencia de interferencias de otros componentes, como impurezas del producto, tampón de fase móvil y disolventes del proceso, y en demostrar la estabilidad, lo que indica la naturaleza del método de ensayo mediante estudios de degradación forzada. El estudio completo en el que se verifican los parámetros mencionados se denomina validación del método.

Métodos y fórmulas de cálculo

En la prueba de HPLC, el método más general para determinar la concentración de una muestra desconocida es mediante un estándar externo. En este método, se suelen inyectar 5 o 6 réplicas de la preparación estándar de concentración conocida, seguidas de 2 preparaciones de muestra independientes de concentración conocida. Por ejemplo, el % p/p del ensayo (ODB) se calcula mediante la siguiente fórmula:

Donde, Asa = Área de pico promedio del compuesto en la preparación de muestra; Asd A = Área de pico promedio de la preparación estándar; Wsd A = Concentración de la preparación estándar en mg/mL; Wsa = Concentración de la preparación de muestra, en mg/mL; LOD = Pérdida por secado de la muestra (% p/p); P = Potencia del estándar.

El informe de HPLC es “% p/p tal cual” o “% p/p en base anhidra” (OAB) o “% p/p en base seca” (ODB).

Parámetros de idoneidad del Sistema

Los criterios de idoneidad del sistema común para un ensayo mediante prueba HPLC son, a saber: (i) cálculo de % RSD (desviación estándar relativa) del área de pico obtenida a partir de inyecciones estándar replicadas, (ii) factor de cola del pico de analito y (iii) platos teóricos obtenidos para el pico de analito en una columna HPLC particular mencionada en el método de análisis. p. ej., % RSD máximo permitido para el ensayo de un ingrediente farmacéutico activo (API) por HPLC, de 5 inyecciones consecutivas del estándar debe ser NMT 0,73% para un límite de 98,0% a 102,0% según el capítulo de la Farmacopea Europea sobre técnicas de separación cromatográfica.

Por qué es importante el ensayo HPLC

Los ensayos de HPLC son esenciales en la fabricación de productos químicos, farmacéuticos, agroquímicos y de bienes de consumo masivo para controlar la calidad y el rendimiento de cada etapa del producto.

Control de calidad farmacéutica

El análisis HPLC de formulaciones farmacéuticas garantiza al fabricante que la formulación comercializada contenga la cantidad correcta de ingrediente activo (API). Además, está directamente relacionado con la salud del paciente. Si la formulación contiene un exceso o una cantidad inferior al requerido de API, podría no tener efectos adversos o incluso ninguno en la salud del paciente.

También facilita la cuantificación de compuestos no deseados (impurezas) en el API o en las formulaciones para garantizar su calidad. Para obtener información detallada sobre Técnicas de análisis de impurezas por HPLC, Incluyendo estrategias de desarrollo de métodos para detectar trazas de impurezas

Costo-Beneficios y Eficiencia

La incorporación del análisis HPLC en la fabricación nos permite obtener reducciones significativas de costos a largo plazo. Un análisis de contenido preciso permite optimizar los productos y seleccionar las materias primas más rentables, minimizando así el desperdicio de material y las ineficiencias de producción.

Conclusión

Las pruebas de HPLC constituyen una medida crítica de control de calidad en las industrias farmacéutica, agroquímica y de bienes de consumo de alta rotación (FMCG). Al garantizar la cuantificación precisa de los ingredientes activos y las impurezas, los ensayos de HPLC protegen la seguridad del paciente, mantienen la eficacia del producto y contribuyen al cumplimiento normativo. La implementación de métodos de HPLC validados no solo garantiza la calidad del producto, sino que también proporciona importantes beneficios económicos mediante la optimización de los procesos de fabricación y la reducción de residuos.

A medida que los requisitos analíticos continúan evolucionando, las pruebas de ensayo HPLC siguen siendo una herramienta indispensable para los fabricantes comprometidos a ofrecer productos seguros, efectivos y de alta calidad al mercado.

Preguntas frecuentes

Reference:

• Snyder, Lloyd R., et al. Practical HPLC Method Development. Wiley-Interscience, 1997, www.wiley.com/en-us/Practical+HPLC+Method+Development%2C+2nd+Edition-p-9780471007036.